首页 > 数学 > 题目详情
SDS-Page电泳,我配的胶总是不凝固配方是这样的：ACR-BIS 4ml tris-hcl （ph8.9）3.8ml
题目内容：
SDS-Page电泳,我配的胶总是不凝固
配方是这样的：
ACR-BIS 4ml
tris-hcl （ph8.9）3.8ml
10% sds 0.1ml
水 2ml
过硫酸铵是现配的 浓度10% 我一开始加的是50ul,试了一次不行,加到了200ul,TEMED 最多加到了100u,可还是不凝固,
除了过硫酸铵和TEMED,可能会是其他成分有问题吗?
我昨天用同样的配方做胶,大约1小时凝固了.今天却两三小时也不凝,放在37度培养箱也没用,过硫酸铵是今天新配的,其他都是昨天的试剂.真是奇了怪了啊优质解答
那聚丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺 浓度是多少,会不会是它的问题. - 追问：
- 聚丙烯酰胺 浓度是 29% 甲叉双丙烯酰胺 浓度是 1% 是现配的 TRIS-HCL是1M的，PH 8.9
- 追答：
- 那没问题啊，你配得聚丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺 有过滤吗？我们的都是避光过滤避光保存的。
- 追问：
- 过滤了，0.50um膜过滤的。棕色瓶子，4°冰箱保存。 acr-bis不太好溶，搅拌了十分钟，还是有一点点白色杂质溶不了。搅拌过程中感觉烧杯变得很冰凉。这正常吗？acr和bis都是进口试剂，保质期内，才开封的，固体室温保存。会不会是这个试剂我配得有问题啊？ 其他试剂，缓冲液PH确认是8.8没错。过硫酸铵是现称现配的，溶解的时候有噼里啪啦的响声。TEMED才买的。我觉得也许就是acr-bis的问题了
- 追答：
- 下边是我们实验室的配方，分离胶大约半个小时凝固，浓缩胶更快。以供参考。 (1) 4×积层胶缓冲液： Tris-Cl 6.06 g 10％(W/V)SDS 4 ml 去离子水溶解定容至100 ml ，用盐酸调至pH 6.8。 (2) 4×分离胶缓冲液： Tris-C1 18.17 g 10％SDS 4 ml 去离子水溶解定容至100 ml，用盐酸调至pH 8.8。 （3）30％聚丙烯酰胺溶液（30%AC）：丙烯酰胺 29 g 双丙烯酰胺(N，N’-甲叉双丙烯酰胺) l g 去离子水溶解并定容至100 ml，滤去不溶物，装入棕色瓶于4℃ 保存。 （4）10％过硫酸铵（AP）：称取1克过硫酸铵溶于9ml双蒸水，定容至10ml，分装冻存备用。 配制： A: 12.5％分离胶 双蒸水 1.62 ml 30%AC 1.95 ml 4×分离胶缓冲液 1.24 ml 10%AP 40μl TEMED 4μl 混匀灌制。 B: 5%浓缩胶 双蒸水 1 ml 30%AC 300 μl 4×浓缩胶胶缓冲液 445 μl 10%AP 30 μl TEMED 5 μl 混匀灌制。
配方是这样的：
ACR-BIS 4ml
tris-hcl （ph8.9）3.8ml
10% sds 0.1ml
水 2ml
过硫酸铵是现配的 浓度10% 我一开始加的是50ul,试了一次不行,加到了200ul,TEMED 最多加到了100u,可还是不凝固,
除了过硫酸铵和TEMED,可能会是其他成分有问题吗?
我昨天用同样的配方做胶,大约1小时凝固了.今天却两三小时也不凝,放在37度培养箱也没用,过硫酸铵是今天新配的,其他都是昨天的试剂.真是奇了怪了啊
优质解答
- 追问：
- 聚丙烯酰胺 浓度是 29% 甲叉双丙烯酰胺 浓度是 1% 是现配的 TRIS-HCL是1M的，PH 8.9
- 追答：
- 那没问题啊，你配得聚丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺 有过滤吗？我们的都是避光过滤避光保存的。
- 追问：
- 过滤了，0.50um膜过滤的。棕色瓶子，4°冰箱保存。 acr-bis不太好溶，搅拌了十分钟，还是有一点点白色杂质溶不了。搅拌过程中感觉烧杯变得很冰凉。这正常吗？acr和bis都是进口试剂，保质期内，才开封的，固体室温保存。会不会是这个试剂我配得有问题啊？ 其他试剂，缓冲液PH确认是8.8没错。过硫酸铵是现称现配的，溶解的时候有噼里啪啦的响声。TEMED才买的。我觉得也许就是acr-bis的问题了
- 追答：
- 下边是我们实验室的配方，分离胶大约半个小时凝固，浓缩胶更快。以供参考。 (1) 4×积层胶缓冲液： Tris-Cl 6.06 g 10％(W/V)SDS 4 ml 去离子水溶解定容至100 ml ，用盐酸调至pH 6.8。 (2) 4×分离胶缓冲液： Tris-C1 18.17 g 10％SDS 4 ml 去离子水溶解定容至100 ml，用盐酸调至pH 8.8。 （3）30％聚丙烯酰胺溶液（30%AC）：丙烯酰胺 29 g 双丙烯酰胺(N，N’-甲叉双丙烯酰胺) l g 去离子水溶解并定容至100 ml，滤去不溶物，装入棕色瓶于4℃ 保存。 （4）10％过硫酸铵（AP）：称取1克过硫酸铵溶于9ml双蒸水，定容至10ml，分装冻存备用。 配制： A: 12.5％分离胶 双蒸水 1.62 ml 30%AC 1.95 ml 4×分离胶缓冲液 1.24 ml 10%AP 40μl TEMED 4μl 混匀灌制。 B: 5%浓缩胶 双蒸水 1 ml 30%AC 300 μl 4×浓缩胶胶缓冲液 445 μl 10%AP 30 μl TEMED 5 μl 混匀灌制。
本题链接：