王老师
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用这方法判断酶活力大小的,实际上刚果红是结合到培养基的多糖底物,但分解纤维素的细菌可以产纤维素酶,能分解这个多糖底物成为寡糖,这样刚果红就不能结合上去了,氯化钠呢就可以使结合不牢的刚果红洗去,这样就留下大大小小的透明圈,大的透明圈当然分解纤维素的能就强啦.
刚果红染色法的原理
刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物.当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红——纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌.
刚果红染色法：
常用的刚果红染色法有两种,一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红.
方法一 在长出茵落的培养基上,覆盖质量浓度为1 mg／mI.的CR溶液,10～15 min后,倒去CR溶液,加入物质的量浓度为l mol／I.的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此时,产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈.
方法二 配制质量浓度为10 mg／mI.的CR溶液,灭菌后,按照每200 mI.培养基加入1 mI.的比例加入CR溶液,混匀后倒平板.等培养基上长出茵落后,产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈.
两种刚果红染色法的比较
刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史,课本中给出了两种方法.方法一是传统的方法,缺点是操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用.方法二的优点是操作简便,不存在菌落混杂问题,缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应.但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊,因为培养基中纤维素占主要地位,因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分.方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分.
