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科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体,利用载体将荧光素酶基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程: (1)利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段,首先需要设计两种引物,序列分别为(5'-CAAC...
题目内容:
科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体,利用载体将荧光素酶基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程:
(1)利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段,首先需要设计两种引物,序列分别为(5'-CAACA·········AAAAC- 3')和(5' -CAAGT·········TCCCC-3')。
两种引物的碱基序列分别与_____________互补,且引物必须具有一定长度(如15一30个左右碱基),以确保_______________________。
(2)切割慢病毒载体DNA,用___________酶将其与荧光素酶基因连接,构建出荧光素酶慢病毒重组载体。用重组载体去感染人淋巴瘤细胞,最终获得能稳定表达荧光素酶的淋巴瘤细胞。对获得的淋巴瘤细胞进行培养,培养温度应为_________,需要的气体主要有O2和CO2,其中CO2的作用是__________________。
(3)通过统计细胞数量,比较含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞(甲)和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞(乙)的生长情况,结果如图(a),据图可看出这两种细胞生长趋势基本相似,说明________________;再分别取第5、6、7、8、9、10代的含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞,加人荧光素酶底物,检测荧光强度,结果如图(b),说明____________________。
(4)将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠(无胸腺)体内,通过检测_________,可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。
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