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为了研究视神经病变诱导基因(OPTN)的分子机制,科研人员用OPTN基因的部分DNA片段构建表达载体,导入细胞后转录出的RNA会抑制细胞中OPTN蛋白的合成。实验中使用的DNA片段和载体上限制酶的识别...
题目内容:
为了研究视神经病变诱导基因(OPTN)的分子机制,科研人员用OPTN基因的部分DNA片段构建表达载体,导入细胞后转录出的RNA会抑制细胞中OPTN蛋白的合成。实验中使用的DNA片段和载体上限制酶的识别序列如下:
限制酶 | BglⅡ | BamHⅠ | HindⅢ | XhoⅠ |
识别序列和切割位点 | A↓GATCT TCTAG↑A | G↓GATCC CCTAG↑G | A↓AGCTT TTCGA↑A | G↓TCGAG GAGCT↑C |
请回答:
(1)应选用BamHⅠ和HindⅢ切割载体质粒,理由是____________。
(2)重组质粒上____________(填“有”或“无”)BamHⅠ的识别序列,因此可通过酶切法鉴定质粒是否重组成功,方法如下:用BamHⅠ和XhoⅠ两种限制酶处理质粒,未重组的质粒将产生____________种片段,重组的质粒将产生____________种片段。
(3)重组质粒导入细胞后,能抑制细胞中OPTN蛋白合成的原因是____________。
(4)要证明导入重组质粒的细胞中OPTN基因的表达受到抑制,需要设置____________作为对照组。通常采用____________法检测细胞中OPTN蛋白的表达水平。
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