题目内容：

（一）某同学为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了如下实验。并通过该实验成功筛选出了能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请回答：

KH2P04	1.4g
Na2HP04	2.1g
MgS04·7H20	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂糖	15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL

 

（1）制备培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、_____________、分装、加塞、包扎、灭菌等。

（2）“目的菌”生长所需的氮源为培养基中的_____________。用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因为__________________________。为检测能降解尿素细菌的存在与否应在培养基中加入酚红指示剂，若存在，则菌落周围将形成_____________色环带。

（3）图中为将细菌转接到固体培养基上，应采用_____________法进行接种，获得单菌落后继续筛选。

（4）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_____________。

A.高压蒸汽灭菌   B.紫外灯照射    C.70%的酒精浸泡     D.过滤

（二）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，下图中标注了在某质粒及某DNA片段上相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BcIⅠ	Sau3A Ⅰ	HindⅢ
识别序列及切 割位点	↓ GGATCC CCTAGG   ↑	↓ TGATCA ACTAGT ↑	↓ GATC CTAG   ↑	↓ AAGCTT TTCGAA   ↑

 

（1）根据表中信息，Sau3A Ⅰ在该质粒上有____________个酶切位点。在将图中质粒和目的基因构建成重组质粒进程中，应从表中选爪的两种限制酶是______________________。

（2）若将BamHⅠ酶切的DNA末端与BcIⅠ酶切的DNA末端连接，对于该连接部位（_____）

A.BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都能切开         

B.BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都不能切开

C.BamHⅠ酶能切开，BcIⅠ酶不能切     

D.BamHⅠ酶不能切开，BcIⅠ酶能切开

（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过_______________酶作用后可形成重组质粒。若将该重组质粒导入大肠杆菌需用_______________处理大肠杆菌，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，应在培养基中添加_______________。