题目内容：

自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途。研究人员欲从土壤中筛选高效的自生固氮菌株进行研究。请回答下列问题：

（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是________(填序号）。

①酒精灯  ②接种环  ③高压蒸汽灭菌锅  ④棉塞

（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。在下图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是_______。

（3）稀释涂布平板法还可用于检验土壤中自生固氮菌的含量，上图中用该方法得到的菌落分布图中，最符合计数要求的是图中的_________。用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？__________。为什么？______________________________________。

（4）分别取0.1mL、已稀释103倍的土壤浸出液，分别涂布到3个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到自生固氮菌的菌落平均数为130。则每g土样中自生固氮菌为__________。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是____________。