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qRT-PCR又称实时荧光定量PCR,是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,间接对待测样品中特定DNA序列进行定量分析的方法。qRT-PCR实验步骤...
题目内容:
qRT-PCR又称实时荧光定量PCR,是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,间接对待测样品中特定DNA序列进行定量分析的方法。qRT-PCR实验步骤:反转录→扩增→检测。qRT-PCR目前主要应用于基因表达水平的检测。请回答下列有关问题:
(1)反转录:在___________酶的作用下,mRNA反转录形成cDNA分子;cDNA与原基因相比,在结构上的不同点有_________________________________。
(2)扩增:用PCR扩增cDNA,首先要制备___________种引物,以便为___________酶提供结合位点,并从引物的___________(填“5′”或“3′”)端开始拼接单个的脱氧核苷酸。
(3)检测:利用荧光标记的化学物质是____________________,随着PCR反应的进行荧光信号强度也等比例增加。
(4)qRT-PCR对基因表达的检测仅限于___________水平,而对于翻译水平的检测常用的方法是___________。
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