题目内容：

在一定剂量范围内苜蓿中的黄酮对动物乳腺上皮细胞增殖具有一定促进作用。为研究不同浓度苜蓿黄酮对乳腺上皮细胞的增殖及其对乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响，科研人员用MTT法以细胞悬液OD值为观测指标测定细胞增殖能力，进行了相关实验研究。请完善实验思路，并根据实验结果进行分析。

实验材料与仪器：

用二甲基亚砜（DMSO）配置的浓度为25、50、75和100µ/mL苜蓿黄酮溶液、用动物细胞培养液配制的一定密度的动物乳腺上皮细胞悬液、光电比色计、MTT法细胞增殖测定仪器等

（要求与说明：MTT法测定细胞增殖具体操作不作要求；乳酸脱氢酶（LDH）活性检测不作要求；在一定细胞数范围内，OD值与细胞数成正比；培养过程中培养液变化忽略不计；实验条件适宜）

（1）完善实验思路

①取若干培养瓶，各加入998mL的细胞悬液，分为5组，编号甲~戊，每组5个重复。

②甲组：加入2mL二甲基亚矾；_______。

③________。

④实验第5天，_______。

⑤________。

（2）结果分析与结论

苜蓿黄酮对某动物乳腺上皮细胞增殖及其乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响

项目	时间/d	甲组	乙组25µg/mL	丙组50μg/mL	丁组75μg/mL	戊组100µg/mL
细胞增殖	3	0．37	0．38	0．38．	0．37	0．37
细胞增殖	5	0．39	0．39	0．41*	0．46*	0．40*
乳酸脱氢酶活性	5	1078．80	675．60*	573．21*	1138．04	796．89*

 

注：表中*表示与对照组比较有统计学上的显著差异，不带*数据表示与对照组无显著差异；（单位：略）

根据上表可得实验结论：

结论一：作用时间较短时（3天），苜蓿黄酮对细胞增殖无明显作用；

结论二：_______；

结论三：_______。

（3）实验分析

细胞呼吸中，乳酸脱氢酶（LDH）催化的反应_______（填“产生”或“不产生”）ATP，这一催化反应发生在_______（填“需氧”或“厌氧”）呼吸中。本实验中还可用细胞培养上清液中LDH的浓度代表细胞的受损程度的原因是_______。为减少微生物对实验结果带来的干扰，实验中的动物细胞培养基中添加的胎牛血清可采用_______（方法）去除杂菌。