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Sanger法DNA测序的核心原理:由于双脱氧核苷酸(ddNTP)五碳糖的2'和3'碳原子都不含羟基,在DNA合成过程中不能形成“相应化学键”,因此可中断DNA分子合成反应。在四个含有4种脱氧核苷酸(...
题目内容:
Sanger法DNA测序的核心原理:由于双脱氧核苷酸(ddNTP)五碳糖的2'和3'碳原子都不含羟基,在DNA合成过程中不能形成“相应化学键”,因此可中断DNA分子合成反应。在四个含有4种脱氧核苷酸(dNTP)的PCR反应体系中分别加入一定比例带有放射性同位素标记的 ddNTP(分别为ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP),在PCR过程中复制随机终止,产生四组不同长度的一系列终止处带有标记的DNA片段,如图1。然后在变性凝胶上进行电泳和放射自显影后,可以根据电泳带的位置确定待测分子的DNA序列,具体过程见下图2。(注:ddA是ddATP的缩写形式)
(1)题干中“相应化学键”是_____,图1过程Ⅰ横线①处加入的物质的特点是________,该过程需要添加引物的原因是______________________。
(2)题干中“在变性凝胶上进行电泳……”中“变性”是指__________,其目的是_________________。
(3)某同学要通过PCR技术获得被32P标记且以碱基“C”为末端、不同长度的子链DNA片段,在反应管中已有模板、引物、酶和相应缓冲液等,还需加入的原料有__________________。
(4)若模板链是“ 3' …TCAGCTCGAATC…5' ”,变性后电泳结果如图2所示,则模板DNA电泳后所处的位置最可能为____(选填“a处”或“b处”),原因是__________。
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