题目内容：

目前，重组蛋白疫苗、腺病毒疫苗、核酸疫苗等多种类型的新冠病毒疫苗都在研发当中。新冠病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，一男子与新冠肺炎患者有接触史，在进行医学隔离期间，检查发现该男子血清中有相应的抗S蛋白抗体出现。某研究小组研制重组蛋白疫苗的简要操作流程如下。请分析回答：

（1）疫苗研制实验步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用DNA连接酶，该酶的作用是_____________________。若不进行步骤②而将S蛋白基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是_______________________。

（2）为了检验步骤⑥所表达的S蛋白是否具有病毒S蛋白的抗原特性，可进行相关实验检测，实验思路是_________________________________。

（3）过程④的大量生产，需对导入表达载体A的大肠杆菌进行筛选和纯化培养。如图是纯化过程中一个平板的菌落分布，该接种方法是___________________；推测接种时可能的操作失误是_________________。

（4）注射疫苗是预防新冠肺炎的有效途径，但是并不意味着接种过新冠疫苗的人将来不会成为新冠肺炎患者。可能的原因有______________________。