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某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端,获得了L1-GFP融合基因,并将...
题目内容:
某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端,获得了L1-GFP融合基因,并将其插入质粒P0,构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切位点如下图所示,图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。据图回答下列问题:
(1)该团队在将L1-GFP融合基因插入质粒P0时,使用了两种限制酶,据图推断它们是____。使用这两种酶进行酶切是为了保证 ____,也是为了保证____的正确连接。
(2)若观察到了____,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了表达的过程。
(3)为获得含有L1-GFP融合基因的牛,该团队需要做的工作包括:将能够产生绿色荧光细胞的____植入牛的____中,再进行体外培养、胚胎移植等相关操作。
(4)可采用胚胎分割移植技术一次获得多头表型相同的转基因牛,在对处于囊胚阶段的胚胎进行分割时,应注意将____。
(5)为检测L1-GFP融合基因是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的____(填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”)作为PCR模板。
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