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WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达,WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。为获得较多WWP2蛋白,利用基因工程技术设计引物,其中正向引物5′含有 EcoRI酶切位点,反向引物5′含有XhoI酶切...
题目内容:
WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达,WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。为获得较多WWP2蛋白,利用基因工程技术设计引物,其中正向引物5′含有 EcoRI酶切位点,反向引物5′含有XhoI酶切位点。将WWP2基因与相应载体构建重组质粒导入人胚肾细胞。回答下列问题:
(1)利用上述的引物,以肺癌细胞的cDNA为模板,通过___________扩增___________的编码序列,获得需要的目的基因片段。
(2)把获得的目的基因片段和相应载体,都用___________进行酶切,分别在5′端与3′端形成___________,避免自身环化。然后利用___________将目的基因片段和相应载体连接,得到重组质粒。
(3)先将重组质粒导入经___________处理过的大肠杆菌细胞,培养后从中分离得到较多的重组质粒。
(4)培养人胚肾细胞时,先用___________使人胚肾细胞分散成单个细胞,用含有___________的合成培养液培养,并将培养瓶置于体积分数为5%的___________与空气混合气体的培养箱中培养。
(5)将重组质粒导入人胚肾细胞中,48小时后提取蛋白质并检测到WWP2蛋白,说明___________。
(6)致癌因子会损伤肺泡细胞中的___________,使原癌基因和抑癌基因发生突变。研究WWP2蛋白的表达,为肺癌治疗新靶点奠定了基础。
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