王老师
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高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基.这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源）,KNO3（作为氮源）,NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O（作为无机盐,为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSO4· 7H2O（作为微生物的微量元素,提供铁离子）等组成.由于磷酸盐和镁盐相混合时产生沉淀,因此,在混合培养基成分时,一般是按配方的顺序依次溶解各成分.对于象FeSO4·7H2O这样的微量成分,则可预先配成高浓度的贮备液,在配制培养基时按需要加入一定的量.
高氏1号培养基配方如下：
可溶性淀粉 20g
NaCl 0．5g
KNO3 1g
K2HPO4·3H2O 0．5g
MgSO4· 7H2O 0．5g
FeSO4·7H2O 0．01g
琼脂 15—20g
水 1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
可溶性淀粉,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H2O,MgSO4·7H2O, FeSO4·7H2O,琼脂, 1mol/L NaOH, 1mol/ LHCl；
试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸（pH5．5—9．0）,棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等.
四、操作步骤
1．称量和溶化
按配方先称取可溶性淀粉,放入小烧杯中,并用少量冷水将淀粉调成糊状,再加入少于所需水量的沸水中,继续加热,使可溶性淀粉完全溶化.再称取其他各成分依次逐一溶化.对微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入,方法是先在100ml水中加入1g的FeSO4·7H2O配成0．01g/ml,再在1000ml培养基中加入1ml的0．01g/ml的贮备液即可.待所有药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积.
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基.它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl.其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐.在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂.琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦.琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用.固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同.
由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖.
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15—20g
水 1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂；
1mol/L NaOH, 1mol/L HCl；
试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸（ pH 5．5—9．0）,棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等.
四、操作步骤
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯.也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片.蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速.另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错.
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解.待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积.如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂.最后补足所失的水分.
3．调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7．6.反之,则用1mol/L HCl进行调节.注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度.
对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行（使用方法,可参考有关说明书）.
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察.一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去（本实验无需过滤）.
5．分装
按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内.分装装置见图Ⅴ-1.
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染.
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜.
(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图Ⅴ-2.分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜.
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6．加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）.
7．包扎
加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、组别、日期.三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期.
8．灭菌
将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2）,121．3℃, 20分钟高压蒸汽灭菌.如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存.
9．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜.
10．无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底.
附：棉塞的制作
棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是保证通气良好.因此,棉塞质量的优劣对实验的结果有很大的影响.正确的棉塞要求形状、大小、松紧与试管口（或三角烧瓶口）完全适合,过紧则防碍空气流通,操作不便；过松则达不到滤菌的目的.加塞时,应使棉塞长度的1/3在试管口外,2/3在试管口内,如图Ⅴ-3.棉塞的制作过程如图Ⅴ-4.
此外,在微生物实验和科研中,常要用通气塞.所谓通气塞,就是几层纱布（一般为8层）相互重叠而成,或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成.这种通气塞通常加在装有液体培养基的三角烧瓶口上.经接种后,放在摇床上进行振荡培养,以获得良好通气促使菌体的生长或发酵
http://bio.biox.cn/Biology/200701/20070106230740_25501.shtml
http://bio.biox.cn/Biology/200701/20070106230741_25502.shtml
