王老师
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细胞冻存融化的原则是缓冻速融
细胞冻存（慢）
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.将预冷的冻存液悬浮细胞,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐）最好；或者可以在4℃,2h；然后转到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.
细胞冻存管融化（快）
1.将细胞冻存管取出,浸入37℃水浴锅内,轻轻晃动,注意融化,当融得只剩一个小冰块时,将细胞插入冰中.
2.加入4℃预冷的培养基,用手指轻弹悬浮细胞团.
3.250g离心10min,去除上清液,再加入培养基,轻轻悬浮.
4.尽量将细胞中的DMSO洗去,计数.
在细胞冻存过程中,所结的冰晶对细胞伤害较大,所以过程一定要慢,DMSO能减少冰晶伤害.
在细胞复苏过程中,要快,以减少融化对细胞的伤害,其实还是冰晶的问题.DMSO浸润的细胞非常脆弱,所以可要尽快将DMSO去除,一定要轻.
