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如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图,所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的基因,质粒A导入细菌B后,其上的基因能得到表达,根据图示所给信息回答下列问题...
题目内容:
如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图,所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的基因,质粒A导入细菌B后,其上的基因能得到表达,根据图示所给信息回答下列问题:
(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时,用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒,露出相同的黏性末端,将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的 ,使质粒与目的基因结合成重组质粒。
(2)目前把重组质粒导入细菌细胞时,效率还不高;导入完成后得到的细菌,实际上有的根本没有导入质粒;有的导入的是普通质粒A;只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒:将得到的细菌涂抹在一个含有 的培养基上,能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的,反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件 、 。
(3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒,将得到的细菌涂抹在一个含有 的培养基上培养,若细菌 ,则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程,应该用 作为探针。
(4)使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内,主要是借鉴 的途径。
(5)目的基因表达成功后,“工程菌”明显不同于细菌B。从变异的来源看,此变异属于 。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是 。
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