题目内容：

已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活。请回答有关基因工程操作的问题：

    (1)图1表示的是一个经过____的作为载体的质粒。作为基因表达载体除图1所示结构外，还需具有____。

    (2)根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是____。若将基因表达载体导人大肠杆菌，一般先用钙离子处理，使其成为感受态细胞，以利于____，然后调控温度完成转化过程。

    (3)为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加____；培养一段时间后，平板上长出菌落。用PCR技术鉴定时，所用的引物是图2中____。PCR技术扩增目的基因，每一循环包括变性、____、____三步。