题目内容：

人类胰岛素基因位于第11号染色体上，长度8416 bp，包含3个外显子和2个内含子，人类胰岛素的氨基酸序列已知。回答相关问题：

（1）上图是利用PCR技术获取人胰岛素基因的方法，该过程在缓冲液中除了要添加模板和引物外，还需要添加的物质有_________，一个DNA分子经过5轮循环，需要引物A____个，从PCR的过程和DNA分子的特点，试着写出设计引物需要注意的问题（答出2点即可）_____________________________________________。

（2）基因工程中需要DNA连接酶，根据酶的来源不同分为两类，其中“缝合”双链DNA片段平末端的是______________________，利用SDS-凝胶电泳分离不同DNA分子，迁移速度取决于____________________________。

（3）将获得的胰岛素基因导入大肠杆菌体内，一般先用_______处理大肠杆菌细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于_________中与该类细胞混合，在一定温度下促进细胞吸收DNA分子完成转化过程。

（4）若利用图示方法获取的胰岛素基因，直接构建基因表达载体后导入大肠杆菌，能不能表达出人胰岛素，说明理由。___________________________________________。