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某植物蛋白酶抑制剂基因是重要的抗虫基因,该基因转录的mRNA下游序列已知,但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因,原理如下图所示,其中①〜③表示有关过程,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示有关物质。请回答。 (1...
题目内容:
某植物蛋白酶抑制剂基因是重要的抗虫基因,该基因转录的mRNA下游序列已知,但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因,原理如下图所示,其中①〜③表示有关过程,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示有关物质。请回答。
(1)过程①反应体系中,需要加入___________种引物,还需加入___________酶,生成杂交键物质Ⅰ。
(2)利用DNA末段转移酶催化过程②,使cDNA单链左侧末端増加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列[AAA(A) n],其目的是便于后续引物设计,进而有利于过程③获得目的基因序列,过程③反应体系需要添加的新引物序列是___________。
(3)与物质Ⅲ的化学组成相比,物质Ⅰ的不同之处在于Ⅰ中含有___________;与过程③相比,过程①中碱基配对方式的不同之处是___________。
(4)在物质Ⅲ的两端通常还需增加___________识别序列,以便与相应的载体重组,再利用Ca2+处理大肠杆菌,使其成为___________细胞,以利于将重组质粒导入细胞。
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