王老师
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叶绿素含有2种呀,请看下面的
叶绿素a在645nm和663nm 处均有吸收,在645nm处吸光系数较小,为16.75,在663nm 处较大,为82.04；叶绿素b 在645nm和663nm 处亦都有吸收,但在645nm处吸光系数较大,为45.60,在663nm 处较小,为9.27.由此可知：叶绿素a的吸收峰值出现在663nm 处,该吸收曲线延伸到645nm处,在此波长处的吸收系数不如在663 nm 处大,因此在计算公式中求算叶绿素a的含量时,需扣除叶绿素b在663nm和645nm 处的吸光度值,再进行计算.
标准分析方法要求,叶绿体色素提取液不可浑浊,在710nm或750nm波长下测量吸光度,其值应小于叶绿素a吸收峰的吸光度值的5％,否则应重新过滤.假定样品在663nm处的吸光度值为0.03,则在750nm处的吸光度值不得大于0.0015,对试液的清澈程度要求很高,测量710nm或750nm的目的是避免悬浮物质的干扰,一般测量水中的浑浊度所采用的波长为680nm,为避免在680nm处仍有叶绿素a产生的吸收值,故将测量浑浊度的波长选在710nm以上.在计算公式中,凡参与计算的各吸光度值都应减去710nm处的吸光度值,以扣除悬浮物质的干扰.
采用分光光度法测定叶绿素含量,对测量仪器分光光度计的波长精确度要求较高.如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2％,叶绿素b为19％,使用前必须对分光光度计的波长进行校正.校正方法除按仪器说明书外,还应以纯的叶绿素a和b来校正.
